第十一条   变更原药品注册批准证明文件及其附件所载明的事项或者内容的，申请人应当按照规定，参照相关技术指导原则，对药品变更进行充分研究和验证，充分评估变更可能对药品安全性、有效性和质量可控性的影响，按照变更程序提出补充申请、备案或者报告。

第二十九条   药物临床试验期间，发生药物临床试验方案变更、非临床或者药学的变化或者有新发现的，申办者应当按照规定，参照相关技术指导原则，充分评估对受试者安全的影响。

第三十一条   药物临床试验被责令暂停后，申办者拟继续开展药物临床试验的，应当在完成整改后提出恢复药物临床试验的补充申请，经审查同意后方可继续开展药物临床试验。药物临床试验暂停时间满三年且未申请并获准恢复药物临床试验的，该药物临床试验许可自行失效 。

第六十六条   对附条件批准的药品，持有人应当在药品上市后采取相应的风险管理措施，并在规定期限内按照要求完成药物临床试验等相关研究，以补充申请方式申报。                                                                                                                                                

背景：

1. I、II 期临床用的是杂交瘤（Hybridoma）细胞株，产量低；II期结束后，变更为CHO细胞株，细胞表达量提高10倍；相应地，主细胞库、工作细胞库都变了；

2. 工艺变更；生产规模变大；生产地点变化；

3. 分析方法变更，采用灵敏度更高、分辨率更高的方法；如下表，

解释变更前后的差异

SEC-HPLC单分离柱、双分离柱图

采用SEC-HPLC 双分离柱，对变更前、变更后样品进行检验，发现了两者的差异。变更后的样品多了杂峰，见下图。把该杂峰分离出来，进行鉴定。

采用CEX-HPLC进行纯度分析，发现了更大的差异。

采用唾液酸酶切后，检验的单克隆抗体是相同的。因为早期使用的杂交瘤细胞株，与CHO相比，产品唾液酸含量非常高。

该单抗可能存在27种异构体。

N端谷氨酰胺（Q）环化形成焦谷氨酸盐(pE)，造成单抗电荷异质性;

C端赖氨酸（K）不均一，正常情况下可以被羧肽酶切除。然而，这种切除是不完全的，通常会导致一条重链或两条重链上还有赖氨酸残基修饰。而当细胞内的羧肽酶水平较高时，两条重链上则没有赖氨酸残基修饰。这便是C末端赖氨酸不均一性，也称为k0、k1、k2。

唾液酸引起的三种电荷可能性。

对于离子交换高效液相（CEX-HPLC），流动相的pH选择非常关键，所以应开发合适pH的离子交换高效液相方法。并且，继续分析有无二硫键错配的异构体。

可比性研究

表1 可比性研究分类分级

表2 在关键临床研究过程中或之后，发生的工艺变更及拟定可比性研究

^a分类AB C D E的定义见表1；

^b分类B包括的仅是放行需要的活性检测试验；

表3 单抗工艺变更的案例，以及证明可比性进行的PK-PD研究^a

^a N/A，not applicable，不适用;

^b进行CDC、ADCC和受体结合ELISA试验;

^c进行活性试验;

^d进行FcgRs、FcRn、ADCC试验;

该案例在美国FDA的申报：变更前的3-5批与变更后的3-5批，进行头对头（head to head）的可比性研究。试验结果满足可接受标准，且没有发现新物质产生，仅在动物水平进行桥接研究，未进行人体桥接研究，直接进入临床Ⅲ期试验关键临床研究。

该案例在欧洲EMA的申报：更换细胞株就是新产品，不接受可比性研究。